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CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9

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CRISPR/Cas9 是一種能夠?qū)蚪M的特定位點進行精確編輯的技術(shù)。其原理是核酸內(nèi)切酶Cas9蛋白通過導(dǎo)向性RNA（guide RNA, gRNA）識別特定基因組位點并對雙鏈DNA進行切割，造成DNA雙鏈斷裂，細胞利用非同源末端連接(Non homologous End Joining，NHEJ）或者同源重組（Homologous Recombination, HR）方式對切割位點進行修復(fù)，實現(xiàn)DNA水平基因敲除或精確編輯。
　　CRISPR/Cas9 系統(tǒng)主要由兩部分組成：
　　1. 單鏈的guide RNA（single-guide RNA，sgRNA）
　　2. 有核酸內(nèi)切酶活性的Cas9 蛋白

 CRISPR基因敲除

　　以基因敲除為目的時，可以利用Cas9-sgRNA對DNA進行切割產(chǎn)生雙鏈斷裂，隨后細胞通過非同源末端連接方式修復(fù)DNA，在此過程中，將隨機引入堿基的缺失或增加，基因發(fā)生移碼突變，導(dǎo)致編碼基因的敲除?！　?/div>

CRISPR基因編輯　　

　　以基因敲入或替換為目的時，需要借助同源重組原理。CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的Cas9-sgRNA在靶位點進行切割產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂，在模板DNA存在時，細胞通過同源重組方式修復(fù)DNA，而模板DNA可以被人為設(shè)計成需要插入的基因或需要修復(fù)的基因，此時細胞編碼目的基因。

載體的選擇（部分）

　　提供病毒載體的含Cas9蛋白的單載和雙載系統(tǒng)，可根據(jù)目的基因序列設(shè)計多條gRNA，載體帶有多種熒光抗性標(biāo)記，方便篩選。
載體類別 編號 載體元件
CRISPR慢病毒單載體 H5070

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
H7072

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
H6825

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
CRISPR慢病毒雙載體 H5068

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE
H5450

pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE
CRISPR  AAV單載體系統(tǒng) H6941

pAAV-CMV-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
H5273

pAAV-hSyn-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
CRISPR  AAV雙載體系統(tǒng) H6291

pAAV-CMV-EGFP-WPRE-U6-spgRNA v2.0

H12663

pAAV-U6-shRNA/spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE

H11012

pAAV-CMV-Luc2-WPRE-U6-spgRNA

 病毒載體服務(wù)流程
 

  • 物種及目的基因名稱
    病毒載體要求與選擇
    其它特殊需求
  • Cas9病毒載體構(gòu)建
    病毒包裝與純化
    滴度測定
  • 高滴度的病毒顆粒
    按合同提供對照病毒
    實驗報告
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