背景介紹
中醫(yī)在疾病治療方面已有兩千多年的歷史。金復(fù)康由12種中草藥組成，長(zhǎng)期用于肺癌的臨床治療。已有研究表明，金復(fù)康可通過干預(yù)ROS介導(dǎo)的DNA損傷通路誘導(dǎo)循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）的凋亡。然而，金復(fù)康是否能抑制CTCs的轉(zhuǎn)移及其機(jī)制尚不清楚。
外泌體是一類大小為30-150nm、呈茶托狀的細(xì)胞外囊泡，廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清及各種體液中。外泌體內(nèi)含有多種蛋白質(zhì)（如TSG101、HSP70等）、核酸（DNA、RNA）和脂質(zhì)（膽固醇、鞘磷脂等），這些內(nèi)容物因釋放外泌體的細(xì)胞不同而有比較大的差異。
本文[1]作者通過對(duì)金復(fù)康處理組與未處理組的腫瘤外泌體進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)金復(fù)康通過干擾EGF信號(hào)通路抑制CTCs轉(zhuǎn)移，從干預(yù)腫瘤外泌體的角度進(jìn)一步探討金復(fù)康抗肺癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
本文課題思路簡(jiǎn)述
文章結(jié)果
1. 金復(fù)康抑制循環(huán)肺腫瘤細(xì)胞（CTC-TJH-01）侵襲性偽足的形成和轉(zhuǎn)移
作者通過免疫熒光染色、侵襲性偽足相關(guān)蛋白（MMP14、cortactin、Tks5）表達(dá)檢測(cè)及細(xì)胞的遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)，揭示了金復(fù)康能抑制CTC-TJH-01細(xì)胞侵襲性偽足的形成和轉(zhuǎn)移（Fig.1）。
Fig.1 金復(fù)康抑制CTC-TJH-01細(xì)胞的轉(zhuǎn)移
2. 循環(huán)肺腫瘤細(xì)胞釋放的外泌體特征
作者通過超速離心分離得到CTC-TJH-01細(xì)胞釋放的外泌體，并通過納米粒徑跟蹤分析（NTA）、透射電鏡（TEM）、western blot（WB）方法鑒定是否得到外泌體。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，作者已成功獲得CTC-TJH-01來源的外泌體（Fig.2）。
Fig.2 外泌體的提取和鑒定
3. 金復(fù)康處理對(duì)循環(huán)肺腫瘤細(xì)胞外泌體的蛋白質(zhì)組分影響
作者將實(shí)驗(yàn)樣本分成兩組，一組是用金復(fù)康處理CTC-TJH-01細(xì)胞后獲得的外泌體，另一組是未用金復(fù)康處理CTC-TJH-01細(xì)胞獲得的外泌體，隨后將這兩組外泌體樣本進(jìn)行蛋白組分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有680種蛋白是顯著變化的，其中255種是上調(diào)的，425種是下調(diào)的。亞細(xì)胞定位顯示，上調(diào)蛋白主要分布在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和胞外區(qū)域，下調(diào)蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核區(qū)域（Fig.3）。
Fig.3 外泌體蛋白的生物信息學(xué)分析
4. 外泌體差異蛋白的功能分類及通路分析
從差異蛋白的功能分類可以看出，這些蛋白參與的最主要的生物過程是核糖體生物發(fā)生和核蛋白復(fù)合體生物發(fā)生。金復(fù)康處理后，EGF信號(hào)通路被顯著抑制，GP6信號(hào)通路被明顯激活。其中EGF信號(hào)通路中mTOR、STAT3、STAT1和PRKCA蛋白表達(dá)下調(diào)（Fig.4-5）。
Fig.4 金復(fù)康干預(yù)后外泌體差異蛋白的功能富集分析
Fig.5 外泌體差異蛋白的信號(hào)通路分析
5. 金復(fù)康通過抑制EGF信號(hào)通路預(yù)防肺癌的轉(zhuǎn)移
作者用WB檢測(cè)了CTC-TJH-01細(xì)胞中的EGF、p-mTOR、p-STAT1、STAT3、p-STAT3、PRKCA、p-PRKCA、Akt1/2/3和p-Akt的蛋白表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這些蛋白的表達(dá)被顯著抑制。加了EGF后，金復(fù)康對(duì)CTC-TJH-01細(xì)胞遷移的抑制作用可以逆轉(zhuǎn)。這些結(jié)果表明，金復(fù)康通過負(fù)調(diào)節(jié)EGF信號(hào)通路，抑制CTC-TJH-01細(xì)胞的轉(zhuǎn)移（Fig.6）。
Fig.6 金復(fù)康通過EGF信號(hào)通路抑制CTC細(xì)胞的遷移
文章總結(jié)
本文作者通過分析循環(huán)腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體蛋白，通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選金復(fù)康抗肺癌轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)。不過本文僅從體外水平驗(yàn)證了金復(fù)康的抗轉(zhuǎn)移功能，還缺乏體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。
參考文獻(xiàn)：
[1] J Ethnopharmacol. 2020 Jun 28;256:112802. doi: 10.1016/j.jep.2020.112802. Epub 2020 Mar 30.
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