【熱點】快看過來！外泌體可以從腦組織中分離出來啦！
外泌體（Exosomes）作為細胞分泌到胞外的一種囊泡，參與不同細胞間DNA、RNA、蛋白質等分子的傳遞，起到了細胞間的通訊作用。近些年，很多學者都在探索外泌體在各個研究領域中扮演的角色和功能，但是由于外泌體的不易獲得性，使得很多方向的外泌體研究舉步維艱。
在神經系統(tǒng)中，由于腦脊液難以得到，要想獲得腦部直接來源的外泌體則難度較大，所以用腦組織分離外泌體對于神經系統(tǒng)研究人員迫在眉睫。且目前外泌體的分離方法很多只適用于分離液體樣本，不太適合直接分離組織。所以九游會j9一直在積極優(yōu)化從腦組織中分離外泌體的方法。
將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化，經水浴、反復輕輕上下顛倒，再用移液槍間斷緩慢吹吸至消化結束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。最后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑跟蹤分子（NTA）和marker WB鑒定。
將提取的外泌體樣本置于冰盒中，使用移液槍吸取外泌體樣本于銅網上靜置1min。(用鑷子夾銅網要輕，防止銅網夾破)。再將銅網上的外泌體樣本吸干，使用移液槍吸取醋酸雙氧鈾染色液室溫染色。隨后將染色完成的樣本放于燈下烤。樣本制好后，觀察拍照，保存圖片。結果如下：
從TEM結果中可以看出，樣本中有典型的外泌體結構，且數(shù)量比較多，大小不一。
準備外泌體樣本，并將外泌體樣本置于儀器中檢測。檢測結果如下：
從NTA結果中可以看出，檢測到的外泌體樣本的顆粒大小在30-150nm范圍，符合外泌體的大。銥帕Ｅǘ仍2*10的11次方以上。
按照實驗室常規(guī)操作進行外泌體樣本的WB實驗。本次測試選擇了三個蛋白指標進行外泌體蛋白鑒定，分別為二陽一陰，即CD9、TSG101和Calnexin。WB結果如下：
從WB結果可以看出，CD9和TSG101在外泌體樣本中呈現(xiàn)陽性結果，Calnexin在外泌體樣本中呈現(xiàn)陰性結果。符合外泌體的蛋白特征。
從以上三種常用的外泌體鑒定結果中可得出，本次使用的從小鼠腦組織中分離外泌體的方法是可行的，能順利獲得需要的外泌體。但是方法中也存在一些不足，從電鏡結果中可以看出，樣本中可能還有一些雜質摻雜，如果要進一步除雜，可能就要面臨損失很多外泌體的風險，所以經常遇到的問題是外泌體的純度和含量很難二者兼得，這是外泌體分離目前一直存在的問題。
不止是腦組織，諸如心肌組織、脊髓組織、骨骼肌組織等都可以經消化分離出外泌體，但是過程中用到的消化液以及實驗過程也會有差別，有待進一步優(yōu)化和探索。也歡迎大家留言合作，一起開發(fā)新方法！
