時(shí)間：2020-10-29 熱度：

   最近科研界什么比較流行？外泌體（Exosomes）是當(dāng)之無(wú)愧的熱點(diǎn)話題。不論在腫瘤領(lǐng)域、神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域還是代謝領(lǐng)域，都有大量的外泌體相關(guān)文章發(fā)表，以探究外泌體的功能和機(jī)制。
   再梳理一下外泌體的基本知識(shí)。外泌體是一類大小為30-150nm、呈茶托狀的由脂質(zhì)雙層膜包裹的細(xì)胞外囊泡，廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清及各種體液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、卵泡液、精液、心包液、乳汁等。外泌體內(nèi)含有多種蛋白質(zhì)（如TSG101、HSP70等）、核酸（DNA、RNA）和脂質(zhì)（膽固醇、鞘磷脂等），這些內(nèi)容物因釋放外泌體的細(xì)胞不同而有比較大的差異。
   外泌體首先需要從樣本中分離出來(lái)，目前比較公認(rèn)的分離方法是超速離心法，再通過(guò)透射電鏡（TEM）、納米粒徑跟蹤分析（NTA）、Western Blot等進(jìn)行鑒定。獲得外泌體后，對(duì)外泌體進(jìn)行標(biāo)記，觀察外泌體被攝取情況，再進(jìn)一步探索外泌體的功能，如組織修復(fù)、腫瘤轉(zhuǎn)移、代謝重建等。下面九游會(huì)j9仔細(xì)聊一聊外泌體標(biāo)記的方法：

一、親脂性染料標(biāo)記：
目前已發(fā)表的外泌體文章中，外泌體大多使用親脂性染料進(jìn)行標(biāo)記，體內(nèi)和體外都較多應(yīng)用。親脂性染料主要分為兩大類，一類是PKH67（綠色熒光）/PKH26（紅色熒光），由于它們可以與外泌體的脂質(zhì)雙層膜穩(wěn)定結(jié)合，所以染色效果較好，應(yīng)用較廣泛。    二類是Di系列的親脂性染料，包括DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光）。其中DiR的紅外熒光可穿透細(xì)胞和組織，在活體成像中用來(lái)示蹤。
二、慢病毒介導(dǎo)CD63-GFP表達(dá)：
   將外泌體的特定蛋白CD63和綠色熒光蛋白GFP的表達(dá)元件構(gòu)建成質(zhì)粒再包裝到慢病毒中，隨后用此慢病毒感染細(xì)胞，使細(xì)胞分泌的外泌體帶有綠色熒光。
三、用金納米顆粒（gold nanoparticles，GNPs）標(biāo)記：
   將金顆粒標(biāo)記的外泌體通過(guò)鼻內(nèi)給藥不僅能進(jìn)行無(wú)創(chuàng)跟蹤，而且能促進(jìn)外泌體在腦部的積累和延長(zhǎng)在病變區(qū)域的存在時(shí)間，增強(qiáng)體內(nèi)神經(jīng)成像的效果。因此，這種外泌體標(biāo)記技術(shù)可以作為多種腦疾病的強(qiáng)大診斷工具，并可能增強(qiáng)基于外泌體的神經(jīng)恢復(fù)治療。
四、用近紅外（NIR）熒光探針進(jìn)行標(biāo)記：
   這是一種使用兩親性探針對(duì)NIR熒光標(biāo)記的外泌體進(jìn)行內(nèi)源性檢測(cè)的方法，無(wú)需對(duì)外泌體進(jìn)行免疫標(biāo)記或合成或色譜處理。由于NIR波長(zhǎng)的熒光探針能穿透體內(nèi)組織，從而提供了從細(xì)胞直接轉(zhuǎn)換到體內(nèi)使用的好處。
五、用Gaussia luciferase（gluc）和截?cái)嗟膌actadherin進(jìn)行標(biāo)記：
   將gLuc-lactadherin構(gòu)成融合表達(dá)的質(zhì)粒，再將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，使細(xì)胞分泌的外泌體帶有強(qiáng)的螢光素酶活性。將標(biāo)記的外泌體進(jìn)行靜脈注射入小鼠體內(nèi)，看外泌體在組織的分布情況。 文章總結(jié)：
外泌體標(biāo)記對(duì)探究外泌體的功能是必不可少的一個(gè)步驟，首先需要觀察到外泌體被受體細(xì)胞吸收或到達(dá)目的組織、器官，再檢測(cè)受體細(xì)胞、組織或器官中相應(yīng)指標(biāo)的變化，看外泌體是否具有一定的功能。確定外泌體具有功能后，再通過(guò)高通量測(cè)序或基因芯片進(jìn)行差異表達(dá)分子的挖掘，進(jìn)一步深入研究機(jī)制。