九游會(huì)j9雙十一?科研不缺席 | 功能性基因篩選文庫(kù)
01
CRISPR/Cas9 gRNA文庫(kù)
CRlSPR/Cas9通過(guò)gRNA指導(dǎo)Cas9核酸酶對(duì)靶標(biāo)基因進(jìn)行DNA修飾，以此造成基因的功能突變或缺失。CRlSPR/Cas9 gRNA文庫(kù)篩選就是利用CRlSPR/Cas9技術(shù)建立哺乳動(dòng)物全基因組突變庫(kù)或者與某類(lèi)功能相關(guān)的基因突變體庫(kù)，通過(guò)功能性篩選和富集以及隨后的PCR擴(kuò)增和深度測(cè)序分析，發(fā)掘與篩選表型相關(guān)的基因。gRNA文庫(kù)是藥物篩選或靶向篩選特定通路的理想工具，gRNA文庫(kù)的建立將在功能基因篩選、疾病機(jī)制研究及藥物研發(fā)等方面發(fā)揮重要的功能。
常用單載體文庫(kù)骨架示意圖：
常用雙載體文庫(kù)骨架示意圖：
02
CRlSPR/Cas9 gRNA文庫(kù)篩選流程
1
gRNA文庫(kù)選擇
首先選擇所需gRNA文庫(kù)。包括全基因組庫(kù)和定制文庫(kù)，采用單/雙慢病毒載體，這兩種模式載體均攜帶有額外的抗性篩選標(biāo)記。
2
gRNA文庫(kù)擴(kuò)增
gRNA載體構(gòu)建完成后混合成一個(gè) pool（即載體混合庫(kù)），隨后將載體混合庫(kù)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，最后抽提質(zhì)粒，即得到了擴(kuò)增后的載體混合庫(kù)，也就是文庫(kù)。
3
gRNA文庫(kù)慢病毒包裝
擴(kuò)增后的gRNA文庫(kù)進(jìn)行慢病毒的包裝，獲得混合型慢病毒庫(kù)，每個(gè)慢病毒載體攜帶單個(gè)gRNA。
4
gRNA文庫(kù)篩選
對(duì)篩選的目的細(xì)胞進(jìn)行病毒感染預(yù)實(shí)驗(yàn)。慢病毒庫(kù)以較低的 MOI 值感染細(xì)胞（確保每個(gè)細(xì)胞最多進(jìn)入一個(gè)慢病毒），隨后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩鴮?duì)細(xì)胞采用相應(yīng)的處理，最后經(jīng)過(guò)不同的篩選方式富集細(xì)胞。
5
PCR擴(kuò)增和NGS測(cè)序
對(duì)富集下來(lái)的細(xì)胞進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，該擴(kuò)增片段包含載體所攜帶的 gRNA 序列，通過(guò)后續(xù)的 NGS 測(cè)序，九游會(huì)j9可以得到富集細(xì)胞中 gRNA 的富集度，從而尋找到相應(yīng)的基因，這些基因很有可能參與藥物作用過(guò)程，因此可作為深入研究的待選基因。
03
九游會(huì)j9生物文庫(kù)信息
在全民雙十一活動(dòng)期間，九游會(huì)j9生物特推出直播間科研產(chǎn)品促銷(xiāo)活動(dòng)，包含病毒產(chǎn)品、外泌體、gRNA文庫(kù)、動(dòng)物模型構(gòu)建、Cre鼠項(xiàng)目、雙螢光素酶、單克隆敲除株等服務(wù)，折扣多多，福利滿滿，更有好禮相送！
11月08日14:00九游會(huì)j9直播間
科研產(chǎn)品巔峰盛惠，火爆開(kāi)搶！
掃描下方二維碼
報(bào)名參與活動(dòng)
掃一掃，反饋當(dāng)前頁(yè)面
7*12在線客服，服務(wù)咨詢
傾耳聆聽(tīng)，一個(gè)工作日內(nèi)及時(shí)處理
15800353038
九游會(huì)j9生物
