◆腺相關(guān)病毒（AAV）是微小病毒科家族的成員之一，是一類無(wú)法自主復(fù)制、無(wú)被膜的二十面體微小病毒，其直徑約20-26nm，含有4.7kb左右的線狀單鏈DNA作為基因組。由于其血清型多樣、免疫原性極低、安全性高、宿主細(xì)胞范圍廣（對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力）、擴(kuò)散能力強(qiáng)、體內(nèi)表達(dá)基因時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)，AAV被視為最有前途的基因研究和基因治療載體之一。

◆純化后的AAV病毒載體可以用于侵染細(xì)胞，侵染細(xì)胞時(shí)，AAV與細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合，激活胞內(nèi)信號(hào)通路，進(jìn)而觸發(fā)AAV通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，在核內(nèi)體、高爾基體等細(xì)胞器的協(xié)助下進(jìn)入細(xì)胞核，隨后病毒裂解，其單鏈DNA復(fù)制成為雙鏈DNA后表達(dá)目的基因。
 

◆AAV是表達(dá)小基因序列的理想載體，廣泛應(yīng)用于體內(nèi)研究中。它們通常被用于向哺乳動(dòng)物的大腦及各組織臟器遞送外源基因、熒光標(biāo)記、鈣指示劑和生理操控工具等。

◆在借助AAV載體進(jìn)行體內(nèi)基因傳遞時(shí)，病毒的注射方式、注射體積及血清型的選擇都是尤為重要。借助定點(diǎn)注射和系統(tǒng)注射，AAV載體能夠在大量細(xì)胞中廣泛表達(dá)，AAV不同的血清型對(duì)于不同細(xì)胞亦有一定的親嗜性，在具體研究時(shí)需注意不同血清型的選擇（九游會(huì)j9生物擁有多年AAV應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，歡迎咨詢）。

◆在體外實(shí)驗(yàn)中，傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為AAV的效率有限，且感染細(xì)胞所需的MOI高。但近年來(lái)開(kāi)發(fā)出的多種新型AAV載體為九游會(huì)j9提供了一些新的思路，如AAV-DJ血清型的AAV對(duì)于體外培養(yǎng)細(xì)胞系的感染效率亦非？曬，這為廣大研究者提供了新的思路。
 

◆慢病毒載體（Lentivirus）是一類改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒載體，是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組是RNA，其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。可利用逆轉(zhuǎn)錄酶將外源基因整合到基因組中實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)，具有感染分裂期與非分裂期細(xì)胞的特性。

◆慢病毒基因組進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞漿中反轉(zhuǎn)錄為DNA，形成DNA整合前復(fù)合體，進(jìn)入細(xì)胞核后，DNA整合到細(xì)胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄成mRNA，回到細(xì)胞漿中，表達(dá)目的蛋白；或產(chǎn)生小RNA。慢病毒介導(dǎo)的基因表達(dá)或小RNA干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定，并隨細(xì)胞基因組的分裂而分裂。
 

◆慢病毒載體具有宿主范圍廣，基因容量大等特點(diǎn)。體外應(yīng)用時(shí)，慢病毒載體能夠有效地感染培養(yǎng)的神經(jīng)元、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型原代細(xì)胞和大部分細(xì)胞系。由于慢病毒的感染具有整合特性，其能夠?qū)⑼庠椿蛴行У卣系剿拗魅旧w上，因而可以達(dá)到持久性表達(dá)，從而構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，用于基因的細(xì)胞功能研究。

◆體內(nèi)應(yīng)用時(shí)，慢病毒載體的應(yīng)用不如rAAV載體應(yīng)用廣泛，因?yàn)槠渚哂幸欢ǖ拿庖咴?，且隨機(jī)整合特性可能導(dǎo)致細(xì)胞功能基因的異常。相比較腺相關(guān)病毒，慢病毒的擴(kuò)散范圍較。潯澩鋦、基因容量更大（可容納4kb），可作為大容量基因的載體。

◆腺病毒（ADV）是一種無(wú)包膜的線性雙鏈DNA病毒，其空間結(jié)構(gòu)為立體對(duì)稱的20面體，衣殼由252個(gè)殼粒組成，直徑在100nm左右?，F(xiàn)已知有51種腺病毒，根據(jù)組織嗜性不同被分成ABCDEF六個(gè)不同亞群，其中C亞群的第2和第5血清型為最常見(jiàn)的腺病毒載體。

◆ADV的包裝過(guò)程依賴于HEK-293細(xì)胞系。ADV對(duì)宿主細(xì)胞的侵染過(guò)程則是通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，基因組并不整合到宿主細(xì)胞基因組中，而是以游離狀態(tài)在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，因而基于腺病毒載體的基因遞送具有瞬時(shí)表達(dá)的特點(diǎn)。
 

◆腺病毒具有廣泛的細(xì)胞和組織感染能力，且其攜帶基因片段的容量大（能達(dá)到7kb左右的容量）。體外應(yīng)用時(shí)，腺病毒載體轉(zhuǎn)基因效率高（接近100%的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率），且可轉(zhuǎn)導(dǎo)不同類型的細(xì)胞，對(duì)于大量難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的基因遞送是一個(gè)很好的工具。在體內(nèi)應(yīng)用時(shí)，腺病毒具有嗜肝的特點(diǎn)，可經(jīng)尾靜脈注射感染肝臟，但由于腺病毒免疫原性強(qiáng)，感染劇烈，故常會(huì)引起動(dòng)物局部組織炎癥反應(yīng)和機(jī)體免疫反應(yīng)，對(duì)動(dòng)物體征和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性造成影響，因此，在利用腺病毒進(jìn)行體內(nèi)研究時(shí)，要考慮其使用劑量。

◆腺病毒可在短時(shí)間內(nèi)快速表達(dá)，一般1-3天即可達(dá)到高峰（tips：對(duì)于快速表達(dá)，亦可以選擇雙鏈腺相關(guān)病毒—scAAV，具有高效、快速、低免疫原性的特點(diǎn)）。另外，由于其基因容量大，這使得腺病毒在大基因片段的表達(dá)中作用重要。
 

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專注于為重組病毒載體產(chǎn)品、溶瘤病毒產(chǎn)品、CAR-T產(chǎn)品等基因治療的先導(dǎo)研究和藥物研發(fā)提供基因治療載體構(gòu)建、靶點(diǎn)及藥效研究、工藝開(kāi)發(fā)及測(cè)試、IND-CMC藥學(xué)研究、臨床I-III期及商業(yè)化GMP生產(chǎn)等一站式CRO/CDMO服務(wù).

 

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