TMT（Tandem Mass Tag）技術(shù)由美國Thermo Fisher Scientific開發(fā)的一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用了6標(biāo)(TMTsixplex™ Isobaric Label Reagent Set）、10標(biāo)(TMT10plex™ Isobaric Label Reagent Set ）、16標(biāo)（TMTpro 16plex）、18標(biāo)（TMTpro 18plex）等同位素標(biāo)簽，通過與肽段特異氨基酸位點(diǎn)相連實(shí)現(xiàn)不同來源的肽段標(biāo)記，然后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析，監(jiān)測碎裂下來的標(biāo)簽實(shí)現(xiàn)肽段定量。一次實(shí)驗(yàn)可靈活比較最多18種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量。
TMT試劑主要由3部分組成：報告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和肽反應(yīng)基團(tuán)。以6標(biāo)試劑為例：報告基團(tuán)相對分子質(zhì)量分別為126、127、128、129、130和131；平衡基團(tuán)相對分子質(zhì)量分別為103、102、101、100、99和98，這樣就形成了6種相對分子質(zhì)量均為229的等量異位標(biāo)簽。報告離子的強(qiáng)度就代表了相應(yīng)樣品中蛋白質(zhì)/肽段的強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)了對不同樣本中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。
技術(shù)優(yōu)勢
1. 靈敏度高：低豐度蛋白也能檢測出
2. 適用范圍廣：幾乎可對任何物種的各類蛋白質(zhì)進(jìn)行分離鑒定
3. 高通量：能同時對18組樣本中包含的蛋白進(jìn)行鑒定及表達(dá)差異分析
4. 高效：液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜連用，自動化操作，分析速度快，分離效果好
樣本起始量與送樣建議
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樣本類型 |
起始量 |
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動物及臨床臟器組織/腦組織等 |
>20mg |
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動物及臨床皮膚/骨/血管/脂肪組織等 |
>100mg |
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植物葉片組織/花 |
>200mg |
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植物根/莖/果實(shí)/種子 |
>500mg |
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原代細(xì)胞/細(xì)胞系 |
>5×106個 |
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總RNA |
>100μg |
注意事項(xiàng)：詳細(xì)樣本準(zhǔn)備指南，請聯(lián)系在線客服。
生物信息學(xué)分析內(nèi)容
項(xiàng)目文章
Luo Z, Peng W, Xu Y, Xie Y, Liu Y, Lu H, Cao Y, Hu J. Exosomal OTULIN from M2 macrophages promotes the recovery of spinal cord injuries via stimulating Wnt/β-catenin pathway-mediated vascular regeneration. Acta Biomater. 2021 Dec;136:519-532. PMID: 34551329.
常見問題
1. iTRAQ及TMT等標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)有什么特點(diǎn)？
iTRAQ以及TMT等標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)分辨率高，細(xì)胞樣品最多可鑒定超過6000個蛋白，并且絕大多數(shù)蛋白都有定量和定性信息；其次是通量高，可以一次最多完成8個（iTRAQ）或者10個（TMT）樣品的實(shí)驗(yàn)，特別適合于多組樣品間的同時比較以及生物學(xué)過程的動態(tài)檢測。
2. 沒有全基因組數(shù)據(jù)的物種該如何進(jìn)行蛋白的鑒定？
對于已經(jīng)公布全基因組序列的物種，可以在得到全序列后構(gòu)建本地建庫并進(jìn)行本地檢索；對于未進(jìn)行全基因組測序的物種，可以采用近緣物種的數(shù)據(jù)庫或者EST數(shù)據(jù)以及轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索。
