久久人搡人人玩人妻精品首页,欧美婬片A在线观看视频,无码av一区二区三区无码,亚洲欧洲第一的日产a片


  • AAV股票代碼
    688238
    腺相關(guān)病毒股票代碼
    688238
    English
    細胞功能學實驗

    細胞功能學實驗

    全國服務(wù)熱線400-151-5198      業(yè)務(wù)咨詢15800353038

    細胞增殖

      細胞增殖與細胞凋亡、細胞周期等是腫瘤研究的重要表型,是分子生物學和藥理學研究解決的問題之一。通過在細胞中過表達或干擾某個基因研究基因?qū)毎鲋衬芰Φ挠绊?,進一步研究基因的功能,或?qū)毎M行藥物處理,研究藥物對增殖的影響。
      實驗原理(CCK-8)
      細胞增殖是生物體的重要生命特征,細胞以分裂的方式進行增殖,是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。細胞增殖的研究方法有很多,主要包括:CCK8/ CellTiter-Glo™等方法。
      Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
     
     
      CCK-8方法優(yōu)勢:
       1 操作簡單,避免細胞計數(shù)過程中人為因素的影響;
       2 細胞用量少,檢測靈敏度高,穩(wěn)定;
       3 可反復用酶標儀讀板,檢測時間靈活,不影響細胞進行后續(xù)實驗;
       4 CCK-8產(chǎn)生的Formazan是水溶性的,無需換液,尤其適用于懸浮細胞,與MTT法相比更方便,更安全。
      目的:考察目的基因?qū)毎脑鲋衬芰Ξa(chǎn)生的影響或藥物對細胞增殖能力的影響
      材料:目的細胞、穩(wěn)轉(zhuǎn)株(空載、目的基因)
      步驟:細胞收集——細胞鋪板——(藥物處理)——細胞培養(yǎng)0、6、24、48、72小時后加入CCK-8處理,酶標儀檢測
      
      實驗原理(CellTiter-Glo™)
      ATP腺嘌呤核苷三磷酸(簡稱三磷酸腺苷)參與生物體內(nèi)多種酶促反應(yīng),是活細胞新陳代謝的一個指標,其含量直接反應(yīng)了細胞的數(shù)量及細胞狀態(tài):實驗過程中向細胞培養(yǎng)基加入等體積CellTiter-Glo™試劑,測量發(fā)光值,在光信號和體系中,發(fā)光值與ATP量成正比,而ATP又和活細胞數(shù)正相關(guān),因此可通過檢測ATP含量得細胞活力。
      CTG方法優(yōu)勢:
      1 同普通的MTT、CCK8法相比,CellTiter-Glo™發(fā)光活細胞檢測系統(tǒng)的檢測試劑具有最高靈敏度和較長的信號持續(xù)時間,此系統(tǒng)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用在生命科學研究領(lǐng)域中,如一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等;
      2 CellTiter-Glo™試劑和細胞培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基兼容,如RPMI1640、MEM、DMEM和 Ham's F12,也不受酚紅和有機溶劑的影響,誤差。既仿矢。
      目的:考察目的基因?qū)毎脑鲋衬芰Ξa(chǎn)生的影響或藥物對細胞增殖能力的影響
      材料:目的細胞
      步驟:細胞收集——細胞鋪板——(藥物處理)——細胞培養(yǎng)0、24、48、72、96小時后加入CellTiter-Glo™溶液用微孔板震蕩器5分鐘,于室溫放置10分鐘-酶標儀檢測熒光值

    細胞凋亡

      細胞凋亡是腫瘤和發(fā)育研究的重點,同時也是藥理學研究的熱點。細胞凋亡是指細胞在一定的生理或病理條件下,遵循自身的程序,自主結(jié)束其生命的過程。它是一個主動的,高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過程。細胞凋亡的過程大致可分為以下幾個階段:接受凋亡信號→凋亡調(diào)控分子間的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→進入連續(xù)反應(yīng)過程。
      基本原理
      細胞凋亡檢測采用Annexin V/PI雙染法檢測,Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)高親和力特異性結(jié)合。在細胞凋亡的早期,PS可從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面,暴露在細胞外環(huán)境中。將Annexin V 進行熒光素(FITC或PE)或Biotin 標記,以標記了的Annexin V 作為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。
      7-AAD類似于碘化丙啶(propidine iodide,PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,7-AAD能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將Annexin V 與7-AAD 匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。
      目的: 通過慢病毒感染獲得過表達某基因的細胞株,利用Annexin-PE和7-AAD雙染法對正常細胞、對照組細胞、基因過表達組細胞的凋亡情況進行檢測,研究基因?qū)毎蛲龅挠绊?。
      材料:質(zhì)粒與細胞株
      步驟:細胞準備——收集細胞——Annexin-PE和 7-AAD進行雙染色——流式上機檢測

    細胞侵襲和遷移

      在腫瘤發(fā)展過程中,細胞進入循環(huán)系統(tǒng)的能力是重要的研究對象。相關(guān)的信號通路主要可以分為控制細胞黏附和控制細胞骨架。細胞的遷移與侵襲主要與細胞骨架和黏附相關(guān)。腫瘤細胞侵襲和遷移能力的改變通常采用Transwell進行檢測。細胞劃痕也是測定腫瘤細胞運動特性的方法,由于無法區(qū)別正常增殖和遷移細胞,應(yīng)用有局限性。
      
           Transwell實驗
      Transwell小室底層的一張有通透性的膜(一般為聚碳酸酯膜),將其放置于孔板中,小室內(nèi)稱上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱下室。由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞。應(yīng)用Transwell可研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。
      腫瘤遷移實驗:研究腫瘤細胞的遷移能力或特定情況下腫瘤細胞的遷移能力。常用8.0、12.0µm膜,上室種腫瘤細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑,計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力。
      腫瘤侵襲實驗:研究腫瘤細胞的侵襲能力或特定情況下腫瘤細胞的侵襲能力。在聚碳酸酯膜上涂上一層基質(zhì)膠,模仿細胞外基質(zhì),上室種腫瘤細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,細胞要把基質(zhì)消化后才可以從上室遷移到下室,計數(shù)進入下室的細胞量測定細胞的侵襲能力。
      目的: 研究目的基因過表達/干擾對細胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響
      材料:正常細胞、對照慢病毒、過表達基因慢病毒
      步驟:細胞復蘇——Transwell鋪板——細胞培養(yǎng)及染色——拍照
      
      劃痕實驗原理
      腫瘤細胞在體外仍具有遷移的能力。細胞劃痕法是測定了腫瘤細胞的運動特性的方法之一。其借鑒體外細胞致傷愈合實驗?zāi)P?,在體外培養(yǎng)的單層細胞上,劃痕致傷,然后比較不同實驗組中腫瘤細胞遷移的能力。
      目的: 使用篩選的穩(wěn)定株(轉(zhuǎn)對照病毒、過表達基因病毒),通過對空細胞、對照穩(wěn)轉(zhuǎn)、目的基因穩(wěn)轉(zhuǎn)三組細胞進行劃痕寬度進行統(tǒng)計學分析,研究基因?qū)毎w移能力的影響。
      材料:病毒和細胞株,目的細胞來源于客戶,穩(wěn)定株九游會j9構(gòu)建
      步驟:細胞鋪板——劃線——細胞培養(yǎng)及拍照——統(tǒng)計分析
     
     
     

    細胞周期檢測

      細胞周期(cell cycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程,分為間期與分裂期兩個階段。細胞周期反應(yīng)了細胞增殖速度,單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。
      原理:
      細胞周期各時相的DNA含量不同,通常正常細胞的 G0/G1期具有二倍體細胞的DNA 含量(2N),而G2/M期具有四倍體細胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI 即碘化丙錠,可以與細胞內(nèi)DNA 和RNA 結(jié)合,采用RNA酶將RNA消化后,通過流式細胞術(shù)檢測到的與DNA 結(jié)合的PI 的熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量的多少。
      因此,通過流式細胞術(shù)PI染色法對細胞內(nèi)DNA含量進行檢測時,可以將細胞周期各時相區(qū)分為 G0/G1期,S 期和G2/M期,并可通過特殊軟件計算各時相的百分率。
      目的: 通過慢病毒感染獲得基因過表達的細胞株,利用PI染色法結(jié)合流式細胞術(shù)檢測各組細胞周期的變化。從而研究目的基因?qū)毎芷诘挠绊?。
      材料:目的細胞、病毒
      步驟:細胞準備——樣品收集——上機檢測——數(shù)據(jù)分析

    克隆形成實驗

      原理:單個細胞在體外增殖6代以上(時間約1周以上),其后代所形成的細胞群體,稱為集落或克隆。每個克隆含有50個以上的細胞,大小在0.3 - 1.0mm之間。細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數(shù), 但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖并形成克隆。只有同時具有貼壁和增殖活力的細胞才會形成克隆??寺⌒纬陕史从臣毎莫毩⑸婺芰Φ膹娙?,用于評價細胞群體依賴性和增殖能力。由于細胞生物學性狀不同,細胞克隆形成率差別也很大,一般初代培養(yǎng)細胞克隆形成率弱,傳代細胞系強; 二倍體細胞克隆形成率弱,轉(zhuǎn)化細胞系強;正常細胞克隆形成率弱,腫瘤細胞強??寺⌒纬陕逝c接種密度有一定關(guān)系,做克隆形成率測定時,接種細胞一定要分散成單細胞懸液,直接接種在培養(yǎng)皿中,持續(xù)一周以上,隨時檢查,到細胞形成克隆時終止培養(yǎng)。
      目的:通過目的基因過表達/干擾細胞組、空細胞組與陰性對照組(空病毒)克隆形成數(shù)量的統(tǒng)計學分析,研究基因?qū)毎后w依賴性和增殖能力的影響。
      材料:病毒和細胞株
      步驟:鋪板——細胞培養(yǎng)——觀察克。舊,計算克隆形成率
      

    一鍵撥號 一鍵導航
    ?掃碼反饋

    掃一掃,反饋當前頁面

    咨詢反饋
    • ?
      人工客服

      7*12在線客服,服務(wù)咨詢

    • 投訴建議

      傾耳聆聽,一個工作日內(nèi)及時處理

    • 咨詢熱線

      15800353038

    掃碼關(guān)注

    九游會j9生物

    返回頂部
    【網(wǎng)站地圖】【sitemap】
    绥阳县| 革吉县| 巫山县| 桂东县| 武清区| 夏津县| 姚安县| 罗平县| 洛浦县| 综艺| 孝感市| 永城市| 新兴县| 宣威市| 奉化市| 当阳市| 罗平县| 绍兴市| 镇安县| 若尔盖县| 繁昌县| 偏关县| 商南县| 东海县| 定州市| 庄浪县| 郧西县| 白玉县| 大庆市| 黄陵县| 万安县| 外汇| 通城县| 平罗县| 南丰县| 山阳县| 鄂尔多斯市| 疏附县| 莱芜市| 巧家县| 盘锦市|