在腫瘤發(fā)展過程中,細胞進入循環(huán)系統(tǒng)的能力是重要的研究對象。相關(guān)的信號通路主要可以分為控制細胞黏附和控制細胞骨架。細胞的遷移與侵襲主要與細胞骨架和黏附相關(guān)。腫瘤細胞侵襲和遷移能力的改變通常采用Transwell進行檢測。細胞劃痕也是測定腫瘤細胞運動特性的方法,由于無法區(qū)別正常增殖和遷移細胞,應(yīng)用有局限性。
Transwell實驗
Transwell小室底層的一張有通透性的膜(一般為聚碳酸酯膜),將其放置于孔板中,小室內(nèi)稱上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱下室。由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞。應(yīng)用Transwell可研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。
腫瘤遷移實驗:研究腫瘤細胞的遷移能力或特定情況下腫瘤細胞的遷移能力。常用8.0、12.0µm膜,上室種腫瘤細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑,計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力。
腫瘤侵襲實驗:研究腫瘤細胞的侵襲能力或特定情況下腫瘤細胞的侵襲能力。在聚碳酸酯膜上涂上一層基質(zhì)膠,模仿細胞外基質(zhì),上室種腫瘤細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,細胞要把基質(zhì)消化后才可以從上室遷移到下室,計數(shù)進入下室的細胞量測定細胞的侵襲能力。
目的: 研究目的基因過表達/干擾對細胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響
材料:正常細胞、對照慢病毒、過表達基因慢病毒
步驟:細胞復蘇——Transwell鋪板——細胞培養(yǎng)及染色——拍照
劃痕實驗原理
腫瘤細胞在體外仍具有遷移的能力。細胞劃痕法是測定了腫瘤細胞的運動特性的方法之一。其借鑒體外細胞致傷愈合實驗?zāi)P?,在體外培養(yǎng)的單層細胞上,劃痕致傷,然后比較不同實驗組中腫瘤細胞遷移的能力。
目的: 使用篩選的穩(wěn)定株(轉(zhuǎn)對照病毒、過表達基因病毒),通過對空細胞、對照穩(wěn)轉(zhuǎn)、目的基因穩(wěn)轉(zhuǎn)三組細胞進行劃痕寬度進行統(tǒng)計學分析,研究基因?qū)毎w移能力的影響。
材料:病毒和細胞株,目的細胞來源于客戶,穩(wěn)定株九游會j9構(gòu)建
步驟:細胞鋪板——劃線——細胞培養(yǎng)及拍照——統(tǒng)計分析