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螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內(nèi)源性螢光素酶，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單報告基因?qū)嶒炌鶗艿礁鞣N實驗條件的影響，而雙報告基因則通過共轉(zhuǎn)染的“對照”作為內(nèi)參為試驗提供一基準線，從而可以在最大程度上減小細胞活性和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對實驗的影響，使得數(shù)據(jù)結(jié)果更為可信。Dual-Luciferase®雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)在細胞中同時表達螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶，兩者沒有種源同源性并對應(yīng)不同的反應(yīng)底物，故而沒有交叉干擾。得益于超強的光信號和超高的信噪比。
miRNA靶基因驗證
miRNA主要通過作用于靶基因的3’UTR起作用（降解或抑制翻譯），將目的基因3’UTR（野生型和結(jié)合位點突變型）序列構(gòu)建至載體中報告基因F-Luc的3’端，通過比較過表達miRNA后，報告基因表達的改變（螢光素酶的活性下降還是不變），來確定miRNA與靶基因3’UTR的作用位點。
目的：驗證 miRNA與靶基因3’UTR 是否發(fā)生調(diào)控作用。
材料：質(zhì)粒pMIR-REPORT Luciferase基因3'UTR（Wt）；pMIR-REPORT Luciferase-基因3'UTR（Mut）；pRL-CMV（H321，Promega）；293T細胞株
步驟：靶點預(yù)測——構(gòu)建質(zhì)粒——轉(zhuǎn)染細胞檢測——報告基因檢測（Luciferase活性檢測）——統(tǒng)計分析
結(jié)果展示：
啟動子活性研究
轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實現(xiàn)共價結(jié)合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。
轉(zhuǎn)錄因子主要通過作用于靶基因的啟動子起作用，將目的基因啟動子區(qū)序列替換報告基因F-Luc的啟動子，通過共表達轉(zhuǎn)錄因子后，報告基因表達的改變，來確定轉(zhuǎn)錄因子與靶基因啟動子結(jié)合位點及對靶基因的作用。
目的：檢測轉(zhuǎn)錄因子對目的基因啟動子活性的影響
材料：實驗質(zhì)粒（pGL4.10-基因promotor）；對照質(zhì)粒； pRL-CMV（E2261，Promega）；轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒；293T細胞株
步驟：靶點預(yù)測——構(gòu)建質(zhì)粒——轉(zhuǎn)染細胞檢測——報告基因檢測（Luciferase活性檢測）——統(tǒng)計分析
結(jié)果展示：
客戶需提供信息：
1 靶基因名稱
2 靶基因種屬
3 調(diào)控因子（miRNA或者轉(zhuǎn)錄因子）名稱
提供給客戶：
1 結(jié)合位點預(yù)測結(jié)果
2 質(zhì)粒及其構(gòu)建報告
3 雙熒光素酶檢測報告
