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脂肪組織（Adipose tissue）是一種松散的結(jié)締組織，主要由脂肪細(xì)胞組成。脂肪組織的主要作用是以“脂肪”的形式儲存能量，亦可為身體作緩沖撞擊及保存熱量。脂肪組織也是身體一個重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)器官，為身體制造激素，調(diào)節(jié)全身代謝穩(wěn)態(tài)。肥胖、2型糖尿病、心血管疾病和胰島素抵抗等疾病的發(fā)生與脂肪組織代謝障礙有關(guān)。因此，借助先進技術(shù)展開對靶向脂肪組織的基因療法對了解脂肪功能及代謝至關(guān)重要。
 

脂肪細(xì)胞類型及脂肪組織分布（PMID: 33793327）
 

重組腺相關(guān)病毒載體（recombinant Adeno-associated virus, rAAV）具有血清型種類多樣、免疫原性低、長期穩(wěn)定表達基因、宿主范圍廣等優(yōu)勢，在基因功能研究和基因治療遞送載體中占據(jù)主導(dǎo)地位?；谵D(zhuǎn)基因動物的局限性，借助AAV載體高效感染脂肪組織研究基因功能成為越來越多研究者的選擇。
 

01  AAV血清型的選擇

AAV血清型種類多樣，AAV1、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9等血清型被報道常用于定點注射感染脂肪組織，其中AAV8血清型通過定點注射在小鼠脂肪組織的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率更高，表達時間更長。
 

scAAV2/8肩胛骨定點注射和腹股溝定點注射感染脂肪組織

脂肪組織遍布全身，調(diào)節(jié)全身代謝穩(wěn)態(tài)，采用定點注射難以大范圍感染全身脂肪組織。AAVRec2血清型可以通過系統(tǒng)注射途徑實現(xiàn)高效、特異轉(zhuǎn)導(dǎo)脂肪組織。此外，不同的給藥方式也會影響AAVRec2血清型對脂肪組織的靶向性，采用口服給藥時，AAVRec2血清型優(yōu)先感染棕色脂肪組織；采用腹腔給藥時，AAVRec2有效轉(zhuǎn)導(dǎo)內(nèi)臟脂肪。

 

rAAV2/8和AAVrec2感染脂肪組織

 

九游會j9生物可提供AAV1-9、AAVRec2等幾十種AAV血清型病毒包裝服務(wù)。

 

02  啟動子選擇

脂肪組織主要由脂肪細(xì)胞組成，脂肪細(xì)胞可細(xì)分為三種細(xì)胞類型:白色、棕色和米色脂肪細(xì)胞。除脂肪細(xì)胞外，脂肪組織中還含有前脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及多種免疫細(xì)胞等，它們統(tǒng)稱為基質(zhì)血管成分細(xì)胞（ stromal vascular fraction cells，SVF）。因此，對于脂肪細(xì)胞的特異性感染可以借助脂肪細(xì)胞特異性啟動子—AdipoQ（脂聯(lián)素，Adiponectin）實現(xiàn)。
 

AdipoQ啟動子特異性感染脂肪組織

 

九游會j9生物可提供CBh、CAG、CMV、EF1a等廣泛表達啟動子，亦可提供特異性感染脂肪細(xì)胞的AdipoQ特異性啟動子，幫助您構(gòu)建高效、特異性靶向脂肪組織的rAAV載體。

 

03  注射方式的選擇
 

 針對脂肪組織感染，常采用定點多點注射，其優(yōu)勢在于降低rAAV載體脫靶效應(yīng)、且病毒用量較少；此外，對于難感染的內(nèi)臟脂肪或大范圍脂肪感染亦可采用腹腔注射AAVRec2血清型實現(xiàn)。

 

脂肪定點注射（PMID: 30783987）
 

04  AAV注射劑量

注射方式	血清型	啟動子	AAV用量	注射體積
定點注射	rAAV2/8	廣譜啟動子：CBh/CMV/CAG/U6等	0.5-1E+11vg	20-40μL，多點注射
		脂肪細(xì)胞特異啟動子：AdipoQ
腹腔注射	AAVRec2	廣譜啟動子：CBh/CMV/CAG/U6等	1-2E+11vg	100μL

 

05 應(yīng)用案例
 

借助rAAV2/8載體搭載Slpi干擾載體（AAV-shSlpi），同時右側(cè)注射對照病毒（同鼠對照），發(fā)現(xiàn)下調(diào)Slpi的表達可以影響Mecp2^Adi KO小鼠體內(nèi)細(xì)胞棕色化現(xiàn)象，并降低產(chǎn)熱基因的表達量。（【Diabetes】燃脂！黃昆 /鄭凌團隊揭示甲基化結(jié)合蛋白Mecp2調(diào)控食物誘導(dǎo)肥胖的分子機制）
 

下調(diào)Slpi 表達影響脂肪細(xì)胞棕色化（PMID: 31597640）

 

病毒產(chǎn)品	AAV8-shSlpi
實驗動物	Mecp2Adi KO小鼠
注射方式	腹股溝定點多點注射
感染部位	腹股溝脂肪
病毒用量	2E+11VG
檢測時間	3周

 

06  脂肪組織

脂肪組織（Adipose tissue）遍布全身，主要由脂肪細(xì)胞組成。脂肪細(xì)胞可細(xì)分為三種細(xì)胞類型:白色、棕色和米色脂肪細(xì)胞，它們的結(jié)構(gòu)、位置和功能各不相同。根據(jù)脂肪細(xì)胞的類型，脂肪組織可分為白色脂肪組織（主要由白色和米色脂肪細(xì)胞組成, White Adipose Tissue, WAT）和棕色脂肪組織（由棕色脂肪細(xì)胞組成, Brown Adipose Tissue, BAT）。WAT是人體脂肪的主要類型，主要分布于皮膚（皮下脂肪，如腹股溝脂肪，富含白色和米色脂肪細(xì)胞）、子宮和卵巢（雌性）或附睪和睪丸（雄性）（性腺脂肪），內(nèi)臟器官周圍（內(nèi)臟脂肪）、骨中央腔（骨髓脂肪），主要作用是儲存能量；BAT主要分布于背部、鎖骨上方（肩胛骨脂肪），椎骨周圍，其主要作用為產(chǎn)熱。
 

脂肪組織分布（PMID: 29320705）

 

參考文獻
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