時(shí)間：2022-04-27 熱度：

 

結(jié)直腸癌（CRC）是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，具有很高的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。由于傳統(tǒng)療法存在毒性、不耐受等缺點(diǎn)，臨床結(jié)果不能令人滿意。因此，迫切需要識(shí)別出敏感的CRC標(biāo)記物，作為早期檢測(cè)和治療的新靶點(diǎn)。近年來，外泌體在癌癥中的作用越來越受到關(guān)注。

在本篇文章中，上海同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院李冬教授和孫祖俊教授等[1]首次揭示了癌癥來源的外泌體circPACRGL在CRC增殖和轉(zhuǎn)移中起致癌作用，并為CRC治療提供了有價(jià)值的標(biāo)志物。
 

作者從兩種CRC細(xì)胞系（HCT116和SW480）上清中分別分離獲得外泌體，經(jīng)過透射電鏡、NTA和WB鑒定后，確認(rèn)已分離出外泌體。隨后，作者用外泌體處理對(duì)應(yīng)的CRC細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)外泌體能顯著促進(jìn)CRC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并減少凋亡。WB結(jié)果也顯示，外泌體能提升CRC細(xì)胞中BCL-2、 N-cadherin、Vimentin、MMP9蛋白水平，和降低E-cadherin、Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9蛋白水平。裸鼠成瘤的結(jié)果表明，外泌體處理能明顯增加HCT116細(xì)胞的轉(zhuǎn)移（Fig.1）。

2.circPACRGL在添加了腫瘤來源外泌體的CRC細(xì)胞中顯著上調(diào)

作者接著分別用外泌體處理了HCT116和SW480，收集了Ex-HCT116和Ex-SW480細(xì)胞樣本，再用未處理組做對(duì)照，進(jìn)行了RNA二代測(cè)序。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，circPACRG在Ex-HCT116和Ex-SW480兩組細(xì)胞中顯著上調(diào)，再用RT-PCR驗(yàn)證了趨勢(shì)是一致的。但是，作者用CRC病人血清來源的外泌體去處理CRC，得到的結(jié)果和上述細(xì)胞中趨勢(shì)不一致，推測(cè)circPACRGL在血清外泌體中的表達(dá)差異可能與腫瘤組織特異性和患者背景有關(guān)。作者進(jìn)一步分離了CRC病人的腫瘤組織外泌體，qRT-PCR結(jié)果顯示circPACRGL的表達(dá)在用腫瘤來源的外泌體（Tumor-EXO）處理的CRC細(xì)胞中顯著上調(diào)。這些結(jié)果表明circPACRGL在受腫瘤來源外泌體刺激的CRC細(xì)胞中顯著增加，并且circPACRGL可能來源于腫瘤來源的外泌體（Fig.2）。

3.circPACRGL發(fā)揮miR-142-3p和miR-506-3p的海綿作用

熒光原位雜交（FISH）結(jié)果顯示，circPACRGL轉(zhuǎn)錄信號(hào)主要分布在 HCT116 和 SW480 細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，少數(shù)在細(xì)胞核中。作者通過在線預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)circPACRGL同時(shí)具有miR-142-3p和miR-506-3p的結(jié)合位點(diǎn)。雙螢光素酶報(bào)告檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)miR-142-3p和miR-506-3p是circPACRGL的靶點(diǎn)。此外，作者發(fā)現(xiàn)在CRC來源外泌體刺激的HCT116和SW480細(xì)胞中miR-142-3p 和miR-506-3p表達(dá)均顯著降低（Fig.3）。

4.TGF-β1是miR-142-3p/miR-506-3p的共同靶點(diǎn)

作者通過在線工具預(yù)測(cè)，找到了TGF-β1是miR-142-3p和miR-506-3p的一個(gè)最佳共同靶點(diǎn)。接著作者通過螢光素酶報(bào)告檢測(cè)、WB、qRT-PCR、miR-142-3p/miR-506-3p inhibitor等一系列實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了這一推測(cè)，即TGF-β1是mir -142-3p和miR-506-3p的共同靶點(diǎn)（Fig.4）。

 

 九游會(huì)j9生物可提供外泌體分離、透射電鏡（TEM）、納米粒徑分析（NTA）、WB標(biāo)志物檢測(cè)（CD9、CD63、CD81、TSG101、Calnexin）、外泌體流式檢測(cè)、外泌體示蹤、外泌體對(duì)細(xì)胞功能學(xué)影響、外泌體動(dòng)物注射、活體成像、病理等服務(wù)。

5.circPACRGL通過調(diào)控miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1軸促進(jìn)CRC增殖、遷移和侵襲

作者推測(cè)circPACRGL可能通過miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1軸調(diào)控CRC的增殖、遷移和侵襲。于是作者設(shè)置了不同的實(shí)驗(yàn)調(diào)控條件，即CRC來源的外泌體處理、circPACRGL敲低、miR-142-3p inhibitor 處理、miR-506-3p inhibitor處理、TGF-β1過表達(dá)等，分別對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分組檢測(cè)，觀察不同組別的細(xì)胞增殖、遷移和侵襲變化。作者的數(shù)據(jù)表明circPACRGL通過調(diào)控miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1軸促進(jìn)了CRC的增殖、遷移和侵襲（Fig.5）。

 

Fig.5 circPACRGL通過調(diào)控miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1軸促進(jìn)CRC增殖、遷移和侵襲
 

6.CRC來源的外泌體circPACRGL通過miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1軸調(diào)節(jié)N1-N2中性粒細(xì)胞的分化

有報(bào)道稱，高水平的TGF-β1與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及N1向N2中性粒細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換有關(guān)。作者通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上述不同組別中N2中性粒細(xì)胞的比例。結(jié)果表明，CRC來源的外泌體circPACRGL可以通過miR-142-3p/miR-506-3p- TGF-β1調(diào)節(jié)中性粒細(xì)細(xì)胞的N1-N2分化（Fig.6）。

本文揭示了腫瘤來源的外泌體可以攜帶circRNAs進(jìn)入腫瘤中性粒細(xì)胞，并通過海綿吸收miRNAs調(diào)控TGF-β的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)中性粒細(xì)胞由N1型向N2型轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此，本研究表明，circPACRGL-miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1軸可能是一種很有前景的CRC治療策略。
 

 

參考文獻(xiàn)：

[1] Mol Cancer. 2020 Jul 27;19(1):117.doi: 10.1186/s12943-020-01235-0. Exosomal circPACRGL promotes progression of colorectal c.ancer via the miR-142-3p/miR-506-3p- TGF-β1 axis