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腺病毒ADV

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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，具有廣泛的細(xì)胞和組織感染能力。感染過程劇烈，適于短時間內(nèi)進(jìn)行基因高表達(dá)的實驗，與其它病毒相比，腺病毒優(yōu)勢在于插入片段較長，表達(dá)活性強(qiáng)。

　　體外應(yīng)用時，腺病毒載體轉(zhuǎn)基因效率高（接近100%的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率），且可轉(zhuǎn)導(dǎo)不同類型的細(xì)胞，對于大量難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的基因遞送是一個很好的工具。但是，在體內(nèi)應(yīng)用時，由于腺病毒免疫原性強(qiáng)，感染劇烈，故常會引起動物局部組織炎癥反應(yīng)和機(jī)體免疫反應(yīng)，對動物體征和實驗結(jié)果的客觀性造成影響。

ADV包裝和侵染過程

腺病毒包裝與純化

　　腺病毒包裝骨架達(dá)質(zhì)粒與穿梭質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞，待細(xì)胞出現(xiàn)CPE狀態(tài)后通過收集細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解物，通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。 

　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒對組織培養(yǎng)細(xì)胞侵染后產(chǎn)生的細(xì)胞變性，利用此種病變效應(yīng)可進(jìn)行病毒定量。
 

腺病毒滴度檢測

　　檢測方法：酶聯(lián)免疫法腺病毒滴度測定，根據(jù)計算感染后染成褐色的陽性細(xì)胞數(shù)，來計算病毒滴度。
       實驗原理：腺病毒感染的陽性細(xì)胞表達(dá)的衣殼蛋白被染成褐色。
       檢測方法：免疫顯色方法
       實驗原理：通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細(xì)胞結(jié)合，再用HRP標(biāo)記的二抗與一抗結(jié)合，經(jīng)顯色液顯色，被感染的細(xì)胞變成褐色，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)，來計算病毒滴度。

腺病毒載體優(yōu)勢

       ① 表達(dá)快，腺病毒感染細(xì)胞后，1-2天即可表達(dá)
       ② 載體容量大，感染效率高，常用于感染難感染的細(xì)胞
       ③ 不整合到染色體中，無插入致突變性
       ④  具有嗜肝性，易于感染肝細(xì)胞，腺病毒的體內(nèi)應(yīng)用是用于感染肝臟

　   不過由于腺病毒免疫原性高，對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎癥，體內(nèi)應(yīng)用需謹(jǐn)慎。

不同病毒的生物學(xué)特性比較

載體選擇

　　九游會j9生物擁有豐富的腺病毒產(chǎn)品，用于操作編碼基因和非編碼基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
       以下腺病毒載體可供您選擇：

調(diào)控方式	載體編號	載體名稱（載體元件順序）	真核抗性	熒光	啟動子	默認(rèn)標(biāo)簽	載體容量
過表達(dá)	H225	pADV-mCMV-MCS-3xFLAG	N/A	N/A	mCMV	3FLAG	>6kb
	H201	pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H213	pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H221	pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H204	pADV-mCMV-mCherry-HA	N/A	mCherry	mCMV	HA	>5kb
	H222	pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry	N/A	mCherry	mCMV	3FLAG	>5kb
	H12588	pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG	N/A	mNeonGreen	CMV	3FLAG	>4kb
	H12589	pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG	N/A	mScarlet	CMV	3FLAG	>4kb
circRNA過表達(dá)	H6946	pADV-CMV-S-circRNA	N/A	N/A	CMV	N/A	>5kb
miRNA過表達(dá)	H216	pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
表達(dá)cre	K0024	pADV-CMV-Cre	N/A	N/A	CMV	N/A	N/A
干擾	DKD001	pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	DKD004	pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry	N/A	mCherry	U6	N/A	N/A
CRISPR敲除	H5064	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9	N/A	N/A	U6	3FLAG	N/A
	H9350	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9	N/A	sfGFP	U6	3FLAG	N/A
	H5066	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	H218	pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	N/A
	H5449	pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	N/A

　　

 

應(yīng)用實例

　　1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝臟]

　　

　　感染部位：肝臟

　　

　　載體名稱：Ad-CBS

　　

　　注射方式：尾靜脈

　　

　　注射量：1 x10¹¹ PFU/mL，10ul

　　

　　檢測時間：7天

　　

　　2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝臟]

　　

　　感染部位：肝臟

　　

　　載體名稱：Ad-ATG7

　　

　　注射方式：尾靜脈

　　

　　注射量：1 x10⁹ PFU /只

　　

　　檢測時間：10天

　　

　　3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]

　　

　　注射部位：大鼠大腦皮層

　　

　　載體名稱：Ad-FBLN

　　

　　注射方式：腦立體定位注射

　　

　　注射量：三種不同劑量

　　

　　檢測時間：7天

　　

　　九游會j9生物腺病毒的生產(chǎn)和質(zhì)控采取了國際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)流程，采用AdEasy及Admax腺病毒包裝系統(tǒng)在HEK-293細(xì)胞中進(jìn)行包裝。所獲得的病毒顆粒經(jīng)過超速密度梯度離心和過濾，并通過殼蛋白免疫法進(jìn)行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在10¹⁰~10¹¹pfu/ml，完全可以滿足各類實驗的使用要求。

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