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    質粒構建

    質粒構建

      九游會j9生物科研服務平臺可為基因功能研究者提供前沿、全面、嚴謹?shù)妮d體設計和載體構建服務,內容涵蓋普通真核表達載體、病毒載體等。
      
      病毒載體構建服務包含慢病毒、腺相關病毒、腺病毒和逆轉錄病毒載體等,構建內容包括基因過表達載體構建、基因定點突變表達載體構建、用于基因沉默的shRNA設計與構建、microRNA表達與封閉載體設計與構建、螢光素酶報告基因載體構建(UTR、啟動子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系統(tǒng)和CRISPR/Cas9基因編輯工具載體設計與構建等,力求一站式解決基因功能研究中的基因上調和基因下調需求。
      質粒優(yōu)勢:
     ?、俦磉_時間快,導入細胞后約24小時可觀察到目的基因表達;
     、詮菇際跫虻,成本低。
      
     、劬龐位醞9的過表達載體庫豐富,并且過表達的標記豐富
      
      熒光標記:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…
      
      標簽標記: FLAG、 HA 、Myc、His tag…
      
      抗性標記:Puro、Neo、Hygro、BSD…
      
      局限性:
      
     、僮臼約輛哂邢赴拘裕褂煤笥跋煜赴刺
      
     、詿蟛糠窒赴夏炎荊鋝壞交蠆僮髂康模
      
     ?、圪|粒不整合到細胞基因組,只能進行短時間的瞬時表達,無法進行觀察周期較長的實驗。
      
      由于單純質粒存在一定的局限性,根據(jù)實驗需要需包成病毒進一步滿足不同實驗的需求。
      不同表達載體的區(qū)別
    表達系統(tǒng) 真核表達載體 慢病毒載體 重組腺相關病毒載體 重組腺病毒載體
    載體基因特性 雙鏈DNA質粒 RNA逆轉錄病毒 單鏈DNA病毒 雙鏈DNA病毒
    外源基因表達時間 24h開始表達,持續(xù)3-7天 2-4天開始表達,長時間穩(wěn)定表達 7-14天開始表達 1-2天開始表達
    插入片段大小 8kb左右 4kb左右 2.8kb左右 6kb左右
    穩(wěn)定細胞株篩選 難操作 可以 不可以 不可以,瞬時表達
    細胞實驗 細胞系,部分轉染效率低 首。閆,感染效率高 不適合 廣譜,感染效率高
    動物實驗 不適合 適合,根據(jù)觀察時間和注射部位 首。莨鄄焓奔浜妥⑸洳課 免疫原性高,慎選
    滴度范圍 108~109TU/ml 1012-1013vg/ml 1010-1011pfu/ml

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