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逆轉錄病毒

逆轉錄病毒

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逆轉錄病毒(Retrovirus),又稱反轉錄病毒,是一種RNA病毒,其兩端為長末端重復序列(LTR)。該病毒呈球形,有包膜,表面有刺突,顆粒直徑為100nm左右。逆轉錄病毒基因組有三個基因:Gag-編碼病毒的核心蛋白;Pol-編碼逆轉錄酶;Env-編碼病毒的被膜糖蛋白。
 
 逆轉錄病毒包裝及侵染細胞過程
逆轉錄病毒包裝采用三質?;蛩馁|粒系統(tǒng)進行包裝,收集細胞培養(yǎng)上清,通過超速離心濃縮純化和收集病毒。

滴度檢測方法:定量PCR檢測干擾后細胞基因組中外源DNA拷貝數。

滴度檢測原理:逆轉錄病毒介導外源基因以逆轉錄方式整合進目的細胞基因組。

逆轉錄病毒基因表達時,需在逆轉錄酶的作用下首先將RNA逆轉錄成DNA,形成DNA整合前復合體,隨后進入細胞核隨機整合到宿主細胞DNA上,經過轉錄、翻譯,完成基因的表達。
逆轉錄病毒包裝及侵染機制
 
 逆轉錄病毒特點
逆轉錄病毒的最大特點在于其特異性感染分裂期細胞,這是因為只有當被感染細胞處于細胞分裂期間,逆轉錄病毒DNA基因組才能接觸到宿主細胞的遺傳物質。
 
不同病毒的生物學特性比較
 
 
基于上述特性,逆轉錄病毒適用于干細胞相關的大量研究,如神經干細胞研究、造血干細胞研究。體內應用時,逆轉錄病毒適用于研究成年新生神經元或膠質前體細胞的工作。
 
 
 逆轉錄病毒應用案例
1、客戶發(fā)表文章:Scientific Reports. (IF=4.122). Xiong Y S,et.al. (2015). Early treatment of minocycline alle-viates white matter and cognitive impairments after chronic cerebral hypoperfusion. [逆轉錄病毒, 卒中]
注射部位:小鼠側腦室SVZ區(qū)
載體:pROV-EF1a-GFP
病毒載體:逆轉錄病毒
病毒滴度:1E+8cfu/mL
注射體積:1ul
 
2、應用案例:Nature.(IF=41.577).Yu YC,et.al. (2009).Specific synapses develop preferentially among sister excitatory neurons in the neocortex. [逆轉錄病毒, 發(fā)育]
注射部位:E12-E13小鼠胚胎
病毒載體:逆轉錄病毒
注射體積:1ul
 

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