外泌體研究一站式解決方案

什么是外泌體？

外泌體是由細(xì)胞分泌的直徑為30~150nm的小囊泡，內(nèi)含來(lái)源于細(xì)胞相關(guān)的蛋白質(zhì)與核苷酸等生物分子，在細(xì)胞交流間起重要作用。具有減少細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管生成、抑制纖維化、提高組織修復(fù)潛力等重要生物學(xué)功能。其具有以下特征：

典型的“杯托”形態(tài)
內(nèi)含的核苷酸包括DNA、mRNA、miRNA、lncRNA等
幾乎存在于所有的體液、組織及細(xì)胞間隙中
幾乎所有的細(xì)胞都能分泌外泌體
不同細(xì)胞分泌的外泌體成分不同

外泌體有哪些功能？

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子）以及功能性的mRNA、miRNA等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、腫瘤侵襲、促血管新生等生理過(guò)程，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)，另一方面也可以作為治療手段，未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床治療。

如何分離外泌體？

外泌體的樣本來(lái)源主要有細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清/血漿、尿液、腹水、乳汁、腦脊液、唾液、滑液等，其中細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清/血漿、尿液是最常見(jiàn)的來(lái)源。如果是使用細(xì)胞培養(yǎng)上清，要注意細(xì)胞培養(yǎng)中一定不能添加FBS。

外泌體分離方法有很多種，包括超速離心、過(guò)濾離心、密度梯度離心、免疫磁珠和商用試劑盒。但是這么多方法中，九游會(huì)j9通常推薦選用超速離心法進(jìn)行提取和分離，因?yàn)槌匐x心方法得到的外泌體不管是從得率還是純度上都比較好。其他方法的特點(diǎn)如下：

1、過(guò)濾離心：得率比較低。

2、密度梯度離心：步驟繁瑣，得率較低。

3、免疫磁珠：特異性比較高，得率較低。

4、商用試劑盒：價(jià)格高，效果一般。分離出的外泌體電鏡和粒徑效果差。

綜合以上，超速離心法是目前價(jià)格適中、得率和純度都能兼得的一種方法。

如何鑒定外泌體？

外泌體鑒定是進(jìn)一步研究外泌體功能和機(jī)制的工作基礎(chǔ)。目前的鑒定方法主要包括透射電子顯微鏡（TEM）進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、納米顆粒追蹤分析（NTA）進(jìn)行粒徑和密度分析、用WB進(jìn)行蛋白標(biāo)志物的鑒定。WB鑒定包括CD63、CD9、CD81、TSG101、Hsp70、syntenin1等。