時(shí)間：2023-03-15 熱度：

在體內(nèi)，大多數(shù)類型的細(xì)胞被認(rèn)為是靜止的，而大部分反轉(zhuǎn)錄病毒DNA基因組只有在細(xì)胞分裂期才能接觸到宿主細(xì)胞的遺傳物質(zhì)。慢病毒的優(yōu)勢特征在于能夠有效感染分裂和非分裂細(xì)胞，且慢病毒較腺病毒有更低的免疫原性，低免疫原性意味著難以在體內(nèi)觸發(fā)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，影響基因轉(zhuǎn)染的效果。因此，慢病毒成為許多體內(nèi)應(yīng)用的選擇。

 

慢病毒可攜帶基因的編碼序列、干擾序列、Cas9-gRNA等，通過不同的注射（給藥）方式實(shí)現(xiàn)靶基因在生物體內(nèi)的基因調(diào)控（過表達(dá)、敲低、敲除）。本期，小編精心整理了客戶文章關(guān)于慢病毒載體通過不同的給藥方式在不同的疾病模型中的應(yīng)用案例，以期提供新的研究思路。

 

01  機(jī)械性痛覺

發(fā)表期刊：Brain Behav Immun

IF：19.227

作者及單位：南京醫(yī)科大學(xué) 劉文濤教授及胡亮副教授

足底切開手術(shù)構(gòu)建模型探究局部注射慢病毒介導(dǎo)的SOCS3過表達(dá)是否可以誘導(dǎo)小鼠的超前鎮(zhèn)痛。結(jié)果顯示，在足底切口手術(shù)前3天，i.t.給予慢病毒載體(LV-SOCS3)顯著促進(jìn)了脊髓中SOCS3的表達(dá)，并抑制了足底切口誘導(dǎo)的小鼠機(jī)械性痛覺超敏。另外，術(shù)前48 h i.t.給予SOCS3 shRNA通過干擾脊髓中SOCS3的表達(dá)顯著抑制克羅卡林（Cro）的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果表明，K_ATP通道開放上調(diào)脊髓SOCS3的表達(dá)顯著抑制小鼠足底切口引起的機(jī)械性痛覺超敏。

 

圖1. 脊髓SOCS3的表達(dá)負(fù)調(diào)控小鼠足底切口引起的機(jī)械性痛覺超敏

 

小鼠模型: 小鼠足底切口（成年雄性C57BL/6J）

給藥方式：鞘內(nèi)注射（i.t.）

調(diào)控方式：LV-SOCS3/LV-shSOCS3/LV-NC（過表達(dá)/干擾）

病毒用量：3.0E+10 TU/mL 10μL/鼠

  

02  神經(jīng)病理性疼痛

發(fā)表期刊：Oxid Med Cell Longev

IF：7.31

作者及單位：徐州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 周成華教授

構(gòu)建SNI模型小鼠于L4或L5腰椎間隙注射慢病毒載體（LV-SIRT3）探索SIRT3在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生中的作用。注射LV-SIRT3后，SNI模型小鼠脊髓中SIRT3蛋白和mRNA水平明顯升高。對照組小鼠在SNI術(shù)后第21天患側(cè)足跖MWT明顯降低，并表現(xiàn)出明顯的冷痛反應(yīng)。但脊髓中過表達(dá)SIRT3的SNI模型小鼠，同側(cè)足爪的機(jī)械和冷痛反應(yīng)得到顯著改善，而對側(cè)無顯著變化。數(shù)據(jù)表明，SIRT3在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。

圖2. 脊髓SIRT3的過表達(dá)減弱同側(cè)肌的疼痛行為

 

小鼠模型: 選擇性神經(jīng)損傷模型SNI（雄性C57BL/6J）

給藥方式：鞘內(nèi)注射（i.t.）

調(diào)控方式：LV-SIRT3/LV-NC（過表達(dá)）

病毒用量：4.41E+8 TU/mL 5μL/鼠 連續(xù)5天

   

 

03  神經(jīng)元

發(fā)表期刊：Cell Mol Life Sci

IF：9.207

作者及單位：南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院神經(jīng)外科 漆松濤教授

通過立體定向注射慢病毒到PEL模型來抑制ME中NKX2.1的表達(dá)，探索NKX2.1在PEL后ME中神經(jīng)元成熟和體液代謝恢復(fù)中的作用。與對照組相比，抑制PEL后ME中NKX2.1的表達(dá)導(dǎo)致遠(yuǎn)期體液代謝更差，血清AVP更低。雖然ME中新生細(xì)胞的數(shù)量沒有明顯改變，但NKX2.1表達(dá)干預(yù)后，新生成熟神經(jīng)元的數(shù)量明顯減少。數(shù)據(jù)表明，NKX2.1參與了PEL后ME中下丘腦NPCs向成熟神經(jīng)元的轉(zhuǎn)化。

 

圖3. 干擾NKX2.1表達(dá)可影響下丘腦NPCs體液代謝預(yù)后及神經(jīng)元分化

 

小鼠模型: 垂體柄電損傷PEL模型（雄性SD大鼠）

給藥方式：立體定位注射

調(diào)控方式：LV-shNkx2.1/LV-NC（干擾）

病毒用量：5.0E+8 TU/mL 1μL/次 注射2次

  

 

04 骨關(guān)節(jié)炎

發(fā)表期刊：Cell Death Dis

IF：9.685

作者及單位：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院 王曉慶

內(nèi)側(cè)半月板不穩(wěn)定(DMM)手術(shù)建立創(chuàng)傷后骨關(guān)節(jié)炎（OA）模型，使用編碼小鼠circFOXO3的慢病毒載體對OA模型進(jìn)行體內(nèi)動(dòng)物研究。DMM術(shù)后第2天將編碼circFOXO3的慢病毒注射入小鼠體內(nèi)。術(shù)后8周采用HE染色、油紅O染色和OARSI分級(jí)評估軟骨破壞情況。結(jié)果顯示，注射編碼circFOXO3的慢病毒組，OA小鼠的軟骨表面有改善，且顯著降低了OARSI評分。

 

圖4. circFOXO3基因治療可保留小鼠OA模型的關(guān)節(jié)軟骨完整性

 

小鼠模型：骨關(guān)節(jié)炎模型（雄性C57BL/6, 8周齡）

給藥方式：關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射

調(diào)控方式：LV-circFOXO3/ADV-shFOXO3/LV-NC（過表達(dá)/干擾）

病毒用量：10μL 緩慢注射

   

05  結(jié)腸炎

發(fā)表期刊：Inflamm Bowel Dis

IF：7.290

作者及單位：南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 陳江寧教授

通過TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠模型進(jìn)一步研究HG-9-91-01在體內(nèi)抗結(jié)腸炎作用是否依賴于SIK/CRTC3軸。在誘導(dǎo)結(jié)腸炎之前給予表達(dá)SIK1、SIK2或SIK3的慢病毒。與對照組相比，表達(dá)SIK1-3的慢病毒處理顯著改善結(jié)腸炎小鼠的SIK1-3表達(dá)，并降低核CRTC3水平，且SIK1-3過表達(dá)顯著抑制了HG-9-91-01在結(jié)腸炎小鼠中的抗結(jié)腸炎作用。此外，SIK1-3慢病毒處理不僅阻止了HG-9-91-01對結(jié)腸IL-10水平的促進(jìn)作用，同時(shí)也阻止了HG-9-91-01對結(jié)腸IL-12和TNF-α分泌的抑制作用。

 

圖5. SIK1-3可消除HG-9-91-01對TNBS誘導(dǎo)小鼠的抗結(jié)腸炎作用

 

小鼠模型：TNBS結(jié)腸炎小鼠（雌性BALB/c）

給藥方式：結(jié)腸內(nèi)注射

調(diào)控方式：LV-SIK1/LV-SIK2/LV-SIK3/LV-NC（過表達(dá)）

病毒用量：1.0E+8 TU/鼠

   

 

06 哮喘

發(fā)表期刊：Int Immunopharmacol 

IF：5.714

作者及單位：南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 荀秋芬

氫氧化鋁建立哮喘小鼠模型探討GLCCI1在哮喘小鼠氣道重塑中的作用，作者使用攜帶GLCCI1的慢病毒通過尾靜脈注射顯著的增加了小鼠肺組織GLCCI1的表達(dá)水平。在GLCCI1過表達(dá)后，ova誘導(dǎo)的氣道阻力上調(diào)顯著降低、支氣管肺泡灌洗液和血清中促炎因子的上調(diào)顯著降低。并且肺結(jié)構(gòu)重塑和炎癥反應(yīng)被部分逆轉(zhuǎn)以及膠原沉積和組織纖維化也得到了改善。

 

圖6. GLCCI1表達(dá)增加可抑制ova引起的氣道重塑

 

小鼠模型: 哮喘小鼠（C57BL/6小鼠）

給藥方式：尾靜脈注射

調(diào)控方式：LV-CLCCI1/LV-NC（過表達(dá)）

病毒用量：2.5E+6 TU/鼠

   

07  肝損傷

發(fā)表期刊：Int Immunopharmacol 

IF：5.714

作者及單位：中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 常冰

飲食中添加酒精喂養(yǎng)8周誘導(dǎo)慢性ALD模型，作者探索了FOXO4對慢性ALD模型小鼠血漿內(nèi)毒素和炎性細(xì)胞因子水平的影響。結(jié)果顯示，過表達(dá)FOXO4可顯著降低內(nèi)毒素水平。與轉(zhuǎn)染FOXO4 WT的小鼠相比，轉(zhuǎn)染FOXO4 TB的小鼠IL-6和IL-1β水平顯著降低，但I(xiàn)L-10水平顯著增加。研究表明FOXO4可通過降低內(nèi)毒素和炎性細(xì)胞因子水平減輕酒精性肝損傷。

 

圖7. FOXO4可以改善酒精性肝損傷

 

小鼠模型: 酒精性肝病模型（雄性C57BL/6  6 ~ 8周齡）

給藥方式：尾靜脈注射

調(diào)控方式：LV-FOXO4-WT-EGFP-3Flag/LV-FOXO4-TB-EGFP-3Flag/LV-NF-κB-EGFP-3Flag/LV- EGFP-3Flag（過表達(dá)）

病毒用量：2.0E+7 TU/鼠

  

九游會(huì)j9生物慢病毒

九游會(huì)j9生物擁有三質(zhì)粒/四質(zhì)粒多種慢病毒包裝系統(tǒng)。涵蓋過表達(dá)/干擾、CRISPR/Cas9、Cumate誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)、Tet-on/off系統(tǒng)、Cre-loxp系統(tǒng)等專屬您的定制慢病毒，同時(shí)也涵蓋CRISPR/Cas9敲除或激活文庫、自噬單標(biāo)或雙標(biāo)、螢光素酶現(xiàn)貨慢病毒產(chǎn)品。

 

九游會(huì)j9生物自主研發(fā)獲批專利的Vpack慢病毒包裝系統(tǒng)，能夠全面滿足在科學(xué)研究中對基因調(diào)控的需求，解決病毒不出毒和滴度低的問題，能保證lncRNA表達(dá)更精確，載體熒光表達(dá)更亮，病毒出毒更穩(wěn)定。

 

九游會(huì)j9生物一直致力于病毒載體的研制服務(wù)，擁有10萬+的病毒包裝經(jīng)驗(yàn)/4.6萬+病毒載體庫，包裝GMP級(jí)別的病毒質(zhì)粒。掃描下方二維碼，獲取更多應(yīng)用細(xì)胞（細(xì)胞系、原代細(xì)胞、干細(xì)胞等）、類器官以及體內(nèi)的基因調(diào)控（過表達(dá)、敲低、干擾等）經(jīng)驗(yàn)。