九游會j9雙十一?科研不缺席 | 功能性基因篩選文庫
01
CRISPR/Cas9 gRNA文庫
CRlSPR/Cas9通過gRNA指導Cas9核酸酶對靶標基因進行DNA修飾，以此造成基因的功能突變或缺失。CRlSPR/Cas9 gRNA文庫篩選就是利用CRlSPR/Cas9技術建立哺乳動物全基因組突變庫或者與某類功能相關的基因突變體庫，通過功能性篩選和富集以及隨后的PCR擴增和深度測序分析，發(fā)掘與篩選表型相關的基因。gRNA文庫是藥物篩選或靶向篩選特定通路的理想工具，gRNA文庫的建立將在功能基因篩選、疾病機制研究及藥物研發(fā)等方面發(fā)揮重要的功能。
常用單載體文庫骨架示意圖：
常用雙載體文庫骨架示意圖：
02
CRlSPR/Cas9 gRNA文庫篩選流程
1
gRNA文庫選擇
首先選擇所需gRNA文庫。包括全基因組庫和定制文庫，采用單/雙慢病毒載體，這兩種模式載體均攜帶有額外的抗性篩選標記。
2
gRNA文庫擴增
gRNA載體構建完成后混合成一個 pool（即載體混合庫），隨后將載體混合庫進行擴大培養(yǎng)，最后抽提質粒，即得到了擴增后的載體混合庫，也就是文庫。
3
gRNA文庫慢病毒包裝
擴增后的gRNA文庫進行慢病毒的包裝，獲得混合型慢病毒庫，每個慢病毒載體攜帶單個gRNA。
4
gRNA文庫篩選
對篩選的目的細胞進行病毒感染預實驗。慢病毒庫以較低的 MOI 值感染細胞（確保每個細胞最多進入一個慢病毒），隨后根據實驗目的而對細胞采用相應的處理，最后經過不同的篩選方式富集細胞。
5
PCR擴增和NGS測序
對富集下來的細胞進行PCR 擴增，該擴增片段包含載體所攜帶的 gRNA 序列，通過后續(xù)的 NGS 測序，九游會j9可以得到富集細胞中 gRNA 的富集度，從而尋找到相應的基因，這些基因很有可能參與藥物作用過程，因此可作為深入研究的待選基因。
03
九游會j9生物文庫信息
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