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質(zhì)粒工藝開發(fā)

菌株庫建立
 

 

不同代次（P1/P5/P10）菌體質(zhì)粒表達(dá)量
 

 

連續(xù)三批次質(zhì)粒生長曲線
 

 

純化工藝開發(fā)經(jīng)驗
 

1. 三步層析：
1) 凝膠過濾層析，有效去除宿主DNA殘留

 
2) 親和層析，去除開環(huán)質(zhì)粒

 
3) 陰離子交換層析，去除內(nèi)毒素

 

 

層析中間過程檢測結(jié)果

步驟	DNA總量(mg)	收率	宿主DNA (μg /mg)	內(nèi)毒素 (EU/mg)	超螺旋質(zhì)粒純度 (HPLC法)
凝膠過濾	88.3	NA	5.6	<200	83.91%
親和層析	67.9	76.9%	1.5	<3.7	91.46%
離子交換	63.0	92.8%	1.1	<0.34	92.46%

 

穩(wěn)定性研究
 

時間、溫度對質(zhì)粒純度及含量變化的影響
 

長期穩(wěn)定性研究-純度（%）

 

長期穩(wěn)定性研究-含量（mg/ml）

 

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